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人参皂苷Rh2抗B16-BL6黑色素瘤转移

2015-05-19

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导读:20(R)-人参皂苷Rh2是一种具有显著抑制恶性肿瘤转移的活性成分,其抑制恶性肿瘤转移可能是与其降低癌细胞的侵袭能力有关。20(R)-人参皂苷Rh2的研究与开发为人类抗击癌症开辟一条新途径。

作 者:陶丽华,刘红岩,韩 锐

摘 要:目的:探讨20 (R)人参皂苷Rh2抗B16-BL6黑色素瘤转移的作用及其机制。方法:采用B16黑色素自发转移模型观察Rh2对B16黑色素瘤转移的作用,观察Rh2对B16黑色素瘤细胞自身侵袭能力的影响。结果:在B16黑色素瘤自发肺转移的实验中,Rh2组C57BL/6N小鼠肺部转移结节数明显减少,Rh2作用后的B16黑色素瘤细胞侵袭人工基底膜能力明显下降。结论:Rh2可明显抑制B16黑色素瘤的肺转移,该作用可能与降低B16黑色素瘤细胞的侵袭能力有关。

关键词:人参皂苷Rh2;B16黑色素瘤;肿瘤肺转移;抗细胞侵袭

笔者研究发现, 20(R)-人参皂苷Rh2对B16黑色瘤的生长具有明显抑制的作用[1]。同时又发现其对B16-BL6黑色素瘤转移具有明显的抑制作用,本实验用B16黑色素自发转移模型观察20(R)-人参皂苷Rh2对B16-BL6黑色素瘤转移的作用[2],同时通过体实验探讨作用机理。

<  1 材料与方法

1. 1 动物及试剂 20(R)-人参皂苷Rh2(以下简称Rh2)自制;阳性药物选择的是抗肿瘤转移模型效果显、临床公认有效的药物Taxo;l B16-BL6小鼠色素瘤胞高转移株由北京药物所提供;实验动物C57BL/6N小鼠60只,由中国医学科学院实验动物中心提供,雄各半,体重18~22g。

1. 2 B16黑色素瘤自发肺转移的实验 取体外培养的数生长期B16黑色素瘤细胞,制备单细胞悬液。C57BL/6N小鼠右后爪垫皮下接种50μL(含2×107/L),接种瘤细胞液,随机分成5组,Taxol为阳性对照,另一完全不给药组为阴性对照组。实验共进行3,其中2批为治疗给药方式,在建立模型后第2天开给药;另一批为预防给药,即在模型建立前2周提前药,给药时间为7周,其余与治疗给药方法完全相。在动物接种肿瘤细胞液后3周,当瘤体≥10mm3,将小鼠用乙醚麻醉,无菌条件下切除患肢, 2周后死动物,取出肺组织用Bouin’s液固定,在解剖显微下(×10)计数肺组织表面肿瘤结节数。采用Mann-WhitheyU-检验进行统计学处理。

1. 3 体外重组人工基底膜侵袭试验 将对数增殖期B16-BL6黑色素瘤细胞用EDTA消化,配制成2×106/mL的细胞悬液,将PVPF滤膜黏于Transwell小室,在滤膜的两面分别涂h-FN与MG5μg,风干后将细悬液加入Transwell小室,实验组加入不同浓度的Rh2,对照组加入等体积的溶剂,置于每孔0. 1%BSA-1640培养基600μL的24孔板内, 37℃, 5%CO2温箱内养4h,将滤膜用甲醇固定,常规HE染色,封片,在光显微镜(400倍)下计数侵袭细胞数,每膜计数5个视,计算每视野侵袭细胞的平均值,进行统计学处理。

2 结 果

2.1 20(R)-人参皂苷Rh2对B16-BL6黑色素瘤自肺转移的抑制作用 在试验中,Rh2给药组小鼠肺转移结节数明显少于对照组(P<0. 05),表明Rh2抑制B16黑色素瘤自发肺转移。

2.2 20(R)-人参皂苷Rh2对B16-BL6黑色素瘤细胞侵袭能力的影响 在试验中,13、65两个给药组侵袭人工基底膜的B16黑色素瘤细胞数分别是(73. 3±2.69)、(29.8±5. 50),与对照组比较,侵袭细胞数明显减少,其中,65组抑制率达67% (P<0.05)。

3 讨 论

恶性肿瘤的侵袭和转移特性是最终导致患者死亡的主要原因。肿瘤转移是一个复杂的过程,而肿瘤细胞侵袭基底膜是其中的一个重要的环节。在体外重组基底膜的实验中观察到20(R)-人参皂苷Rh2可显著降低B16黑色素瘤细胞的侵袭能力。

肿瘤细胞侵袭基底膜包括其首先与基底膜黏附,进而分泌Ⅳ型胶原酶降解基底膜,最后做阿米巴运动穿过基底膜等三个步骤,有研究表明,黑色素瘤与基底膜的黏附作用与层黏连蛋白(Lam in in, LN)受体α6β4和αvβ6密切相关[3-5]。此外, LN与肿瘤细胞表面整合素受体结合引起受体的丛集,该变化作为外界信号启动细胞信号转导,从而调节某些基因的表达,既有可能促进肿瘤细胞的运动和基质蛋白酶的分泌,此外,细胞内Ca2+浓度增高,可以通过激活蛋白激酶C和肌动蛋白重组而促进细胞运动,并增强肿瘤细胞与基底膜的黏附能力,促进肿瘤细胞的侵袭能力。

综上所述,20(R)-人参皂苷Rh2是一种具有显著抑制恶性肿瘤转移的活性成分,其抑制恶性肿瘤转移可能是与其降低癌细胞的侵袭能力有关。20(R)-人参皂苷Rh2的研究与开发为人类抗击癌症开辟一条新途径。

参考文献:

[1] 陶丽华,高峰,魏建华,等. 20(R)-人参皂苷Rh2抗B16-BL6黑色素瘤的抑制作用[J].人参研究, 1995, 7(4): 41

[2] 韩锐.抗癌药物研究与实验技术[M].北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社, 1997. 353-368

[3] 辛勇,倪劲松,王心蕊,等. 20(s)-人参皂苷Rg3抗B16-BL6黑色素瘤转移的作用[ J].吉林大学学报(医学版), 2004, 30(1):520

[4] 陶厚权,姚明,邹寿春,等.血管生成抑制剂Rg3对胃癌生长和转移作用的实验研究[J].中华外科杂志, 2002, (8): 606

 

[5] LishiH,TatsutaM. Inhibition by ginsenosibe Rg3of bom beenhancedperitonealmetastinaladanocarcino induced by azoxymethane inW istayrats[J].ClinMetastasis, 1997, 15(6): 603

 

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[关键词: 文献 黑色素瘤 ]

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