硫酸长春碱的测定方法

　　【检查】酸度 取本品15mg，加水10ml溶解后，依法测定(附录VI H)，pH值应为3.5～5.0。

　　溶液的澄清度与颜色 取本品50mg，加水10ml溶解后，溶液应澄清无色，如显色，与黄色1号标准比色液(附录Ⅸ A 第一法)比较，不得更深。

　　有关物质 取本品适量，用水溶解并稀释制成每1ml中含0.4mg的溶液，作为供试品溶液(1);精密量取1ml置25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(2)。另取硫酸长春碱和硫酸长春新碱适量，用加水溶解并稀释制成每1ml中分别含0.4mg的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。照高效液相色谱法(附录V D)测定。用十八烷基硅烷键合硅胶(粒度5μm)为填充剂;检测波长262nm;以二乙胺溶液(取二乙胺14ml，加水986ml，混匀，用磷酸调pH7.5)-乙腈200ml与甲醇800ml的混合液(32:68)为流动相;柱温30°C。分别量取系统适用性试验溶液、供试品溶液(1)和(2)各200μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的3倍。在系统适用性试验溶液记录的色谱图中，硫酸长春碱峰和硫酸长春新碱峰的分离度应大于4.0;在供试品溶液记录的色谱图中，测量峰面积，按下列公式计算。

　　(1) 单个杂质不得大于1.0%。

　　(2) 杂质总量不得大于3.0%。

　　式中：ri为除溶剂峰外供试品溶液(1)中单个杂质峰面积;

　　rt为除溶剂峰外供试品溶液(1)中杂质峰面积的和;

　　rv为供试品溶液(2)中硫酸长春碱峰的峰面积。