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人参皂苷Rh2对人结肠癌细胞株SW620和LOVO生长的抑制作用

2014-08-04

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导读:摘要目的:探讨人参皂苷 Rh2对人结肠癌细胞株 SW 620和 LOVO 生长的抑制作用。

摘 要 目的:探讨人参皂苷 Rh2对人结肠癌细胞株 SW 620和 LOVO 生长的抑制作用。

方法: 体外培养人结肠癌细胞株 SW 620和 LOVO ,加入终浓度分别为 20 ~100μmol/L 的人参皂苷 Rh2。采用 MTT法测定药物对细胞的的增殖抑制率 ( IR ) ,并计算半数抑制浓度 ( IC50) 。倒置显微镜观察细胞形态。结果:人参皂苷 Rh2作用 SW 620和 LOVO 24 小时 IC50分别为 36μmol/ l和 40μmol/L;

显微镜观察 ,药物作用后细胞出现明显的凋亡形态。结论:人参皂苷 Rh2对 SW 620和 LOVO 细胞的生长具有抑制作用 ,且呈时间剂量依赖性。

关键词 人结肠癌细胞株 人参皂苷 Rh2 细胞增殖

Inh ib ition Effect of G in senoside Rh2 on Proliferation of SW 620 and LO VO cells DA I Qun, L IU Pei. Zhe jiang Province Herba list Hosp ita l, Hangzhou (310006) , Ch ina Abstract O bjective: To investigate the effect of ginsenoside Rh2 on human colon cancer cell line SW 620 and LOVO cells. M ethods: Human colon cancer cellswas cultured in vitro and was treated w ith Rh2 of the final concentration of 20~100μm /L. Inhibition rate was evaluated by MTT assay and the half maximal inhibitory concentration IC50 was calculated. Morphology of apop tosiswas studied by m icroscope. Results:The IC50 values of SW 620 and LOVO were 36 m /L and 40μm /L after 24h, respectively. Apop tosis was obvious. Conclusion : Ginsenoside Rh2 can inhibit the p roliferation of SW 620 and LOVO cells in a time and dosagedependent manner.

Key words human colon cancer cells ginsenoside Rh2 p roliferation

肠癌是人类高发的消化系统恶性疾病 ,在恶性肿瘤发病率中排第 4 位 ,转移和复发是大肠癌患者死亡的主要原因之一。目前临床以手术治疗并辅以术后放、化疗为主要治疗手段 ,但对晚期肠癌效果并不显著。人参皂苷是从中药人参中提取的具有抗癌作用的主要活性成分 , 以往的研究表明其能诱导细胞分化和凋亡而发挥抗肿瘤作用。国内外文献先后报道人参皂苷 Rh2 对多种肿瘤细胞如人肝癌细胞SK2HEP21、乳腺癌细胞及白血病细胞 HL60等具有抑制增殖和诱导凋亡作用。本实验旨在研究人参皂苷 Rh2 对人结肠癌细胞增殖的抑制作用。

1 资料与方法

1. 1 药品与试剂 人结肠癌细胞株 SW 620和LOVO购自上海中国科学院细胞库。胎牛血清购 自Hyclone公司, F12和 L 15培养基购自吉诺公司,噻唑蓝 MTT 购自AMER SCO 公司,人参皂苷 Rh2购自中国药品制品检定所。

1. 2 细胞培养 细胞 SW 620单层接种在含 10%胎牛血清的 L 15培养液中,细胞 LOVO 单层接种在含10%胎牛血清的 F12 培养液中, 37 ℃, 5% CO 培养箱中培养。

1. 3 实验方法

1. 3. 1 细胞增殖抑制实验  收集对数生长期的SW 620和 LOVO 细胞 , 以 1 ×105 /L 密度接种于 96孔培养板中,每孔 100μl,待细胞贴壁后加入终浓度为 20、30、40、50、60、70、80、100 mol的 Rh2,每个浓度设平行孔 4个 ,于37℃, 5% CO培养箱中继续培养 24、48和72小时,每孔加入 5mg/mL的MTT20 L ,继续培养 4 小时后 , 离心弃上清 ,加入150 L DM SO溶解 ,酶标仪 490nm 处检测 OD 值 ,计算药物的体外生长抑制率 ( IR ) IR = ( 1 - 给药孔平均值 /对照孔平均值) 所对应的药物浓度 (IC50 ) 。×100% ,计算 50%抑制率时所对应的药物浓度 (IC50 ) 。

1. 3. 2 细胞形态学观察 上述细胞在加入 MTT之前 ,倒置显微镜照相 ,记录细胞形态学变化。

1. 4 统计学方法  采用 SPSS13. 0 进行统计学分析 ,所有数据用 x ±s 表示,采用 t检验

2 结果

2. 1 人参皂苷 Rh2 对人结肠癌细胞株 SW 620 和LOVO 生长的抑制作用 不同浓度 Rh2作用于细胞后不同时间,细胞毒作用呈明显的时间和剂量依赖性, 见图 1 ~5。Rh2 对SW 620细胞的IC50为36μmol/L ,而对 LOVO细胞的IC50为40μmol/L作用时间均为 24小时。

2. 2 细胞形态观察 加药组细胞体积变小、变形出现皱缩、变圆、脱落现象,细胞核固缩凝块,见图 6~7。

3讨 论

以往研究显示 ,人参皂苷 Rh2 作为抗肿瘤作用非常显著的中药单体 ,可以通过降低细胞内 Ca2+浓度抑制 PKC α的转位和激活 , 进一步抑制细胞 内PKCα蛋白的表达 ,最终阻碍 PKCα介导的增殖信号传导过程 ,抑制肿瘤细胞增殖 , 同时抑制端粒酶活性 ,使肿瘤细胞的端粒长度不能维持而进入衰老并最终死亡[2 ] 。Rh2可通过线粒体途径诱导细胞凋亡[ 3 ] ,且其作用后使 DNA 含量较多的 S期细胞数量减少 , 而 DNA 含量较少的 G1 期细胞数量增多[4 ] ,进一步发挥阻滞细胞周期的作用。同时 Rh2是特异性抑制 Pgp 功能的逆转剂[ 5 ],一定程度提高肿瘤对多种化疗药物的敏感性 ,减少化疗药物的临床用药剂量和毒副作用[ 6, 7 ] 。我们研究发现 ,人参皂苷 Rh2单体对结肠癌细胞株 SW 062 和 LOVO 的生长有抑制作用 ,且与时间和浓度呈依赖性。同时, 还发现 Rh2有体外诱导细胞凋亡的作用 ,显微镜下观察细胞出现浓缩、变圆、脱落等细胞凋亡形态学改变。本研究结果表明,人参皂苷 Rh2单体有抑制结肠癌细胞增殖和诱导其凋亡的作用 ,有潜在治疗结肠癌的应用价值 ,但其具体机制尚有待于进一步研究。

参 考 文 献

[ 1] 曾小莉 ,涂植光. 人参皂苷 Rh2 对人肝癌细胞 SMMC721信号传导的影响 [ J ]. 中华肝脏病杂志 , 2004, 12(9) : 565566.

[2 ] Zeng XL , Tu ZG. In vitro induction of differentiation byginsenoside Rh2 in SMMC7721 hepatocarcinoma cell line[J ]. Pharmacol Toxico, 2003, 93 (6) : 275283.

[ 3 ] Fei XF,W ang BX, Tashiro S, et al. Apototic effects of ginsenoside Rh2 on human malignant melanoma A 375S2cells[J ]. Acta Pharmacol Sin, 2002, 23 (4) : 315322.

[4 ] 周桂华 ,孟艳 ,李扬 ,等. 人参单体皂苷 Rh2对前列腺癌细胞株 PC3细胞移行周期的影响 [J ]. 中国病理生理杂志 , 2002, 18 (7) : 723825.

[ 5 ] 张晖,王华庆 ,张会来 ,等. 人参皂苷 Rh2 逆转 P2gp 介导的MCF27 /ADM 多药耐药性的基础研究 [J ]. 肿瘤 , 2007, 27 (5) : 365369.

[ 6 ] 焦玉莲 ,王强修 ,李建峰,等. 人参皂苷 Rh2 增强紫杉醇诱导 Hela 细胞的凋亡 [ J ]. 中华肿瘤防治杂志 , 2006, 13 (21) : 62321626.

[ 7 ] 侯毅鞠 ,袁忠海 ,郭素红 ,等. 人参皂苷 Rh2对 A ra2c诱导 HL60细胞增殖抑制和凋亡作用的影响 [J ]. 山东医药杂志 , 2009, 49 (23) : 1415.

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