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人参皂昔Rh2诱导人类肝细胞SK-HEPl细胞凋亡的研究

2014-08-04

抗癌健康网

导读:报告一种环激酶抑制剂p21 WAF 1/CIPI在通过人参皂昔Rh2 (G-Rh2)处理诱导的SK-HEP-1细胞凋亡的早期阶段经过蛋白酶解加工成为较小的片段pI4的过程。

  报告一种环激酶抑制剂p21 WAF 1/CIPI在通过人参皂昔Rh2 (G-Rh2)处理诱导的SK-HEP-1细胞凋亡的早期阶段经过蛋白酶解加工成为较小的片段pI4的过程。酶解加工的过程是caspase-3激活的结果,并伴随细胞形态学和DNA裂解的早期变化。当与从G-Rh2处理的细胞获得的细胞提取物一起孵化时,迁移的p21WAFI/CIPI在体外被切割成一个p14片段。通过添加一种特殊的caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO切割被抑制,而不是特殊的caspase-1抑制剂Ac-YVAD-CHO抑制。与此相似,在E.coli中通过再结合caspase-3,p21WAFI/CIPI被有效地切割。突变分析可鉴定出两个caspase-3切割位点,DHVD l12/L和SMTD149/F,位于细胞周期蛋白Cdks和PCNA相互作用的区域内或周围。之后检验caspase-3调制的p21WAFI/CIPI片段是否作为一个细胞周期蛋白/Cdk2激酶活性正向调节功能的基本过程,已知这个过程是需要通过不同的刺激诱导凋亡的执行过程。结果显示G-Rh2一诱导的p21WAFI/CIPI的切割与细胞周期蛋白A/Cdk2活性的提高有关,但与细胞周期蛋白E/Cdk2的活性无关。用G-Rh2处理之后,在细胞中p21WAFI/CIPI的过分表达有效但部分抑制凋亡和正向调节细胞周期蛋白AlCdk2激酶活性。抑制作用在与p21WAFI/CIPI( p21D112N)对抗caspase3分裂的突变异种转移的细胞中更为明显。通过比较,细胞周期蛋白A或Cdk2的过分表达正向调节细胞周期蛋白A/Cdk2激酶的活性和凋亡。这些正向调节作用可被任一个细胞周期蛋白A或Cdk2共同表达的支配的负性Cdk2 ( Cdk2-do)有效地阻断。另外,一种特异性细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂olomoucine也能够有效抑制通过人参皂昔Rh2诱导的凋亡细胞死亡。收集所有的数据,作者提出人参皂昔Rh2通过与细胞周期蛋白A激酶复合物有关的p21WAFI/CIPI分解蛋白的分裂方式导致SK-HEP 1细胞凋亡。p21WAFI/CIPI的蛋白酶解的切断对于细胞周期蛋白A/Cdk2活性的正向调节及人参皂普Rh2诱导的细胞凋亡的完成都是一个必要的过程。

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